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生物治療蛋白質(zhì)是一類(lèi)高度復雜的分子，通常使用重組方法通過(guò)發(fā)酵進(jìn)行生產(chǎn)。然而，該生產(chǎn)過(guò)程中會(huì )產(chǎn)生許多這些蛋白質(zhì)的不同異構體。要想保證此類(lèi)藥物的質(zhì)量，必須先確保產(chǎn)品的正確生產(chǎn)、任何雜質(zhì)的準確鑒定和定量，并且對蛋白質(zhì)的效價(jià)進(jìn)行測定。

如何準確測量治療性蛋白的有效性與穩定性？工欲善其事必先利其器采用適宜的分析系統，對于獲得可靠數據至關(guān)重要。Agilent 1290 Infinity II 生物液相色譜系統具備 1290 Infinity II 液相色譜儀的所有優(yōu)勢，并在此基礎上增加生物兼容性流路，可實(shí)現生物制藥中關(guān)鍵質(zhì)量屬性的高性能分析。系統提供了適應不斷變化環(huán)境的靈活性，且易于從常規系統進(jìn)行方法轉移。別讓千里之堤毀于蟻穴除了液相系統外，色譜柱的生物惰性也直接影響著(zhù)數據準確性，因為色譜柱是影響流路中金屬含量的最大因素。Agilent AdvanceBio 液相色譜柱經(jīng)過(guò)精心設計和制造，能夠在分析高度復雜的生物治療分子以及監測它們的純度、效價(jià)和其他關(guān)鍵質(zhì)量屬性時(shí)，為您提供可靠的結果，部分具有 PEEK 內襯。您的流路是否生物兼容？去除流路中的不銹鋼可以提高回收率、改善峰形并提高靈敏度如圖所示，不銹鋼色譜柱硬件是克服回收率問(wèn)題的最大阻礙（圖 1中）。帶 PEEK 內襯的色譜柱（圖1上、下）可最大程度提高回收率和靈敏度，同時(shí)明顯改善峰形。

圖 1. 在安裝帶 PEEK 內襯的 AdvanceBio MS Spent Media色譜柱和不銹鋼InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 色譜柱的 1260 Infinity II 生物惰性液相色譜和 1260 Infinity II 液相色譜上，分析腺苷 (A)、AMP、ADP 和 ATP 得到的 HILIC-DAD 色譜圖
具有 PEEK 內襯的不銹鋼色譜柱，有效消除金屬誘導干擾AdvanceBio SEC 1.9 μm 色譜柱，SEC/MS 應用的最佳選擇這些帶 PEEK 內襯的色譜柱可減少與不銹鋼表面的相互作用，而這種相互作用可能導致額外的聚集。這些色譜柱具有 2.1 mm 的窄內徑，運行流速僅為 0.05–0.10 mL/min，適用于靈敏的天然模式蛋白質(zhì)分析。此外，它們的惰性親水涂層使您可以使用濃度較低的揮發(fā)性流動(dòng)相，同時(shí)盡量減少非特異性相互作用。因為大部分不銹鋼色譜柱帶有裸露的活性金屬位點(diǎn)，所以需要用生物樣品進(jìn)行鈍化，以獲得可接受的重現性水平。帶 PEEK 內襯的不銹鋼色譜柱沒(méi)有活性金屬位點(diǎn)，可以減少色譜柱灌注需求，并能節省您的時(shí)間和樣品。您還可以使用 AdvanceBio SEC 標準品檢查這些色譜柱的質(zhì)量，方法與 SEC 不銹鋼色譜柱類(lèi)似。圖 2. 在 Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 系統中，在變性條件下（使用甲酸作為離子對試劑）使用乙腈水溶液對肌紅蛋白分子進(jìn)行體積排阻色譜分析。在變性條件下，解卷積質(zhì)量對應于脫輔基蛋白肌紅蛋白，其中不再有血紅素基團。而在天然模式下，解卷積質(zhì)量對應于全肌紅蛋白（血紅素基團仍然完整），其中僅有少量脫輔基蛋白肌紅蛋白。AdvanceBio PLRP-S 1000 ? 5 μm 色譜柱，用于完整蛋白質(zhì)分析的優(yōu)異惰性PLRP-S 填料是完整蛋白質(zhì)分析的行業(yè)領(lǐng)導者。惰性 PLRP-S 1000 ? 聚苯乙烯-二乙烯基苯固定相的大孔徑具有出色的傳質(zhì)性能，可確保出色的蛋白質(zhì)回收率，且殘留極少。其聚合物基座本身具有疏水性，可使用與質(zhì)譜兼容的離子對試劑（如甲酸）進(jìn)行反相分離。而且，不含殘留硅醇基，可獲得極佳的峰形。此外，色譜柱帶 PEEK 內襯的硬件最大程度降低了由次級金屬相互作用而產(chǎn)生干擾的風(fēng)險，如氧化和峰拖尾。圖 3. 對于整個(gè)分析，帶 PEEK 內襯的不銹鋼色譜柱可通過(guò)減少由次級金屬相互作用導致的峰拖尾，同時(shí)保持相似的洗脫曲線(xiàn)和保留時(shí)間，來(lái)明顯提高對稱(chēng)性。AdvanceBio 2.7 μm EC-C18 色譜柱，專(zhuān)為生物兼容性生物兼容性 (U)HPLC 儀器設計全封端 C18 硅膠固定相擁有出色的保留特性，適用于酶解的蛋白質(zhì)中常見(jiàn)的各種肽。此外，它們的表面多孔 Poroshell 顆粒無(wú)需極高操作壓力即可提供高性能。我們建議將 EC-C18 用于不銹鋼色譜柱可能與組分（如磷酸化肽）相互作用的應用，或會(huì )增加不穩定氨基酸（如蛋氨酸）柱上氧化的應用。

好色譜柱，必配好接頭

如果使用不合適的接頭連接 Peek 內襯色譜柱，將會(huì )對柱頭內 PEEK 內襯部件造成不可修復的損壞。

因此，我們推薦使用 UHP-FF fitting（Bio-inert，首推）、Quick Turn fitting（僅連接色譜柱端）或 Quick Connect fitting（需與熱交換器組件配套使用），并配合 PK/ST 毛細管線(xiàn)。

為了得到最佳的實(shí)驗結果，我們推薦整體的 Agilent InfinityLab Bio-inert Solution: PEEK 內襯的色譜柱搭配 InfinityLab Bio-inert LC System 和 Bio-inert Quick Connect column heat exchanger 共同使用。