在這個(gè)地球上存在一種生物，它使用藍色的鮮血挽救了我們很多人的性命，它是我們安全用藥的衛士，然而我們大多數人卻不知道它名字甚至不知道它的存在！
鱟（圖片來(lái)源：Wikipedia）
鱟（Limulidae）讀音[hòu] 就是我們今天的主角，它是一種古老的物種，從地質(zhì)歷史時(shí)期古生代的泥盆紀就一直存活至今。這位來(lái)自大海的遠古遺民一旦雌雄結合后便形影不離，?？菔癄€，相依為命。有“海底鴛鴦”的美稱(chēng)，一旦出現生命危險，雌的先被抓住，雄的會(huì )生死不離，義無(wú)反顧地殉情，但是如果雄的先被抓住，雌鱟丟下伴侶逃之夭夭……
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看到這里，大家不要誤解雌鱟，這是因為雄鱟雖然不愿意自己?jiǎn)为毺用?，但是卻愿意放“妻子”一條生路。雄鱟為愛(ài)殉情，是悲壯的生命與愛(ài)情專(zhuān)一的絕唱！而雌鱟的逃脫也是一種智慧的抉擇和生存的需要，畢竟它寄托著(zhù)丈夫的希望，孕育著(zhù)丈夫的生命延續。
鱟，趴在海邊的沙灘上安詳的曬了約四億年的太陽(yáng)，終于在最近幾十年找到了用武之地。但這也是它們悲慘命運的開(kāi)始……
Drs.Frederick B. Bang and Jack Levin
自1968年美國科學(xué)家Levin和Bang發(fā)現并建立鱟實(shí)驗方法以來(lái)，細菌內毒素鱟試劑檢查法在注射藥品質(zhì)量控制領(lǐng)域發(fā)揮了巨大的作用，避免了靜脈注射后的發(fā)熱，讓靜脈療法得以迅速推廣。內毒素檢測也成為保證藥品安全的重要檢查項目之一。
在中國我們也應該感謝一下這位吳老先生
吳偉洪先生中國鱟試劑事業(yè)的開(kāi)拓者之一及1983出版的鱟與鱟試驗法論文匯編
吳偉洪先生在鱟試劑領(lǐng)域是個(gè)傳奇人物，開(kāi)創(chuàng )了從白丁到國內鱟試劑（東方鱟TAL）領(lǐng)域的先驅者傳奇故事。上世紀七十年代吳偉洪帶領(lǐng)三五個(gè)人的團隊就做出了國內第一支鱟試劑，填補了鱟試劑在國內的空白，開(kāi)創(chuàng )了鱟試劑在國內檢測歷史，為鱟試劑在國內的推廣和普及做出來(lái)巨大的貢獻。
鱟試劑是從海洋動(dòng)物鱟提取的血細胞溶解物,是檢測革蘭氏陰性細菌內毒素的一種敏感試劑。鱟試劑會(huì )和內毒素起反應形成凝膠，內毒素通俗一點(diǎn)說(shuō)就是細菌死亡的細胞壁分泌物，如果含有內毒素的藥品，注射到人體里就會(huì )發(fā)熱，嚴重的就會(huì )死亡。因此只要是要注射或者輸入或者植入人體的藥品，器械都需要做內毒素檢測。鱟試驗(Limulustest)可作為革蘭氏陰性細菌敗血癥、腦膜炎和尿路感染等的一種快速、敏感的診斷方法,并可應用于注射藥品及生物制品的熱原質(zhì)檢測,衛生學(xué)上可用來(lái)檢查各種水質(zhì)和食品污染的程度。
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不同于其他物種的血液中含有鐵離子，血液是紅色的。鱟血液中含有銅離子，攜氧后變成藍色，它也是地球上為數不多的擁有藍色血液的動(dòng)物。在最近的幾十年里，它們已經(jīng)變成了人類(lèi)的救命藥。鱟的血液可以制成專(zhuān)用于細菌內毒素檢測的試劑TAL或LAL，目前這已發(fā)展為龐大的產(chǎn)業(yè)，由美國食品藥品監督管理局（FDA）、中國國家藥品監督管理局（NMPA）等各國食藥監督管理機構授權生產(chǎn)的每種藥物，都必須經(jīng)過(guò)TAL或LAL測試，用于檢測革蘭氏陰性細菌細胞壁的成分脂多糖（內毒素）的含量是否超標，盡可能避免靜脈注射或手術(shù)引起的發(fā)熱反應。
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鱟試驗檢測法的靈敏度超乎你的想象，它能檢測小于萬(wàn)億分之一克（0.000000000001 Grams）的熱原，萬(wàn)億分之一沒(méi)有什么概念，這么說(shuō)吧，它相當于等于320世紀中的1秒，奧林匹克標準尺寸游泳池中的1粒砂糖。
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這樣的超級靈敏度讓TAL和LAL可以準確、快速地檢測人體內部組織是否因細菌感染而致??；可以確保所有進(jìn)入靜脈或體內的藥物、器械是安全可靠的。內毒素的濃度和反應的啟動(dòng)時(shí)間程負相關(guān)，濃度越高，反應啟動(dòng)時(shí)間越短。
因此鱟如果一旦消失，對現代生物醫學(xué)將會(huì )有巨大的沖擊。很不幸的是，現有的鱟的生存情況并不好，特別是生活在亞洲地區的鱟：海堤的建設，導致其產(chǎn)卵的海灘面積逐步縮減；海洋的污染、過(guò)度捕撈都成了鱟數量不斷減少的原因，我國廣東 、廣西 、福建等省已將其列入二級保護動(dòng)物。
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現在，TAL和LAL已經(jīng)成為一個(gè)價(jià)值數百萬(wàn)美元的行業(yè)。據報道，1夸脫（1夸脫約為0.946升）鱟血液價(jià)值高達17，000美元，而一套試劑的價(jià)格高達1000美元。昂貴的試劑價(jià)格以及瀕危的數量都成為了科學(xué)家尋找替代TAL和LAL的動(dòng)力。
雖然鱟試劑在內毒素檢測中扮演著(zhù)重要的角色，但是這種基于鱟采血的生產(chǎn)方式，現階段正面臨著(zhù)嚴峻的挑戰。因為可用于采血的鱟越來(lái)越少了，就在這個(gè)時(shí)候，一個(gè)偉大人物出現了。
丁玲，新加坡國立大學(xué)生物學(xué)教授Jeak L. Ding National University of Singapore |NUS · Department of Biological Sciences
從上個(gè)世紀80年代開(kāi)始，丁玲教授通過(guò)十余年的不懈努力，基于轉基因技術(shù)終于開(kāi)發(fā)出了LAL的替代品，第一個(gè)非鱟血指示劑測試盒在2003年問(wèn)世。
至此，我們的故事才剛剛開(kāi)始：
由于丁玲教授的努力，我們從傳統的取鱟血，開(kāi)發(fā)試劑，用于細菌內毒素的檢測方法，發(fā)展到利用現代基因工程技術(shù)生產(chǎn)無(wú)動(dòng)物源的重組C因子（rFc）內毒素檢測試劑，讓已經(jīng)曬了四億年的鱟又可以稍稍松一口氣，繼續悠閑地的在海灘上曬太陽(yáng)了。
但是最初制藥公司對此也沒(méi)有多大興趣，仍然繼續熱衷使用傳統的鱟血法進(jìn)行檢測，其原因主要有以下幾點(diǎn)：
1、在最初開(kāi)始的時(shí)候，重組法的穩定性不如傳統方法。
2、重組法試劑較傳統方法更貴。
3、這項技術(shù)是基于丁玲的技術(shù)專(zhuān)利，并且只允許了一家瑞士化學(xué)公司LONZA供應這種合成試劑，制藥企業(yè)不想被一家公司牽著(zhù)鼻子走。
4、LONZA一直在和另外一家公司為rFc方法的專(zhuān)利使用權打官司。
隨著(zhù)時(shí)間的推移，LONZA也意識到一家獨大未必是好事，2013年，LONZA和Hyglos達成和解，LONZA不再是唯一的供應商。Hyglos成為第二家生產(chǎn)合成因子C的公司。在監管方面，歐洲藥典于2016年增加了因子C作為公認的細菌-毒素測試，FDA及美國藥典已接受重組C因子法（rFC）作為一種替代方法，日本藥典基于rFC方法與傳統鱟試劑法的研究，承認該方法無(wú)差別。這也為鱟試劑的變革鋪平了道路?，F在，越來(lái)越多的制藥企業(yè)加入合成毒素指示劑的制造中。
在歐洲、美國、日本等發(fā)達列強陸續認可rFc檢測方法后，中國食品藥品檢定研究院也與時(shí)俱進(jìn)緊追科技前沿，于2015年在一部分省市食藥監局開(kāi)展rFC方法可行性論證，筆者也有幸受邀參與部分實(shí)驗。
簡(jiǎn)單總結一下rFC內毒素熒光檢測方法優(yōu)點(diǎn)：
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內毒素特異性，重組技術(shù)消除了鱟試劑中β-1,3-葡聚糖對檢測結果的干擾，導致潛在假陽(yáng)性的產(chǎn)生
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避免鱟的個(gè)體化差異所導致的鱟提取試劑的批次不穩定，最終導致結果批間差異較大。rFc利用基因工程技術(shù)，可以獲得更小的批間差異。
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可預測的，可靠的檢測性能
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可持續資源，供應穩定，沒(méi)有動(dòng)物源的限制
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終點(diǎn)熒光法，可比其他定量鱟試劑方法
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具有廣泛的靈敏度范圍（0.0.005-50.0EU/ml）
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藥典收納
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我們先來(lái)介紹一位巨頭：LONZA - A Global Leader in Life Sciences
LONZA（龍沙） 瑞士的制藥化工巨頭，龍沙集團是一家以生命科學(xué)為主導，在生物化學(xué)、精細化工、功能化學(xué)等行業(yè)均處于領(lǐng)先地位的全球性跨國公司，具有一百多年歷史，總部位于瑞士巴塞爾。2018年LONZA龍沙實(shí)現全年銷(xiāo)售額55億瑞士法郎。
PyroGene? rFC試劑盒是Lonza公司生產(chǎn)的重組法熒光檢測試劑盒，是傳統內毒素的檢測測試的演變。通過(guò)內毒素結合并激活的重組C 因子能夠切割底物獲得游離的熒光基團,熒光基團的釋放與內毒素的濃度呈正比,從而使得內毒素被定量檢測。
更多關(guān)于PyroGene rFC的信息可以參考試劑盒說(shuō)明書(shū)
為了全面推廣PyroGene rFC方法，LONZA公司花重金從BioTek Instruments定制了PyroWaveXM熒光內毒素檢測儀，該儀器具有卓越的溫控能力， rFC特異性專(zhuān)屬光學(xué)元件，完美的支持rFC檢測，提供穩定可靠的檢測結果。
說(shuō)起Hyglos這家公司，可能了解的人不多。但是他的母公司幾乎就是行業(yè)內無(wú)人不知無(wú)人不曉了，大名鼎鼎的法國公司生物梅里埃（bioMérieux）。
生物梅里埃是全球診斷領(lǐng)域的十大生產(chǎn)商之一，全球細菌學(xué)市場(chǎng)第一，全球第二大感染性疾病診斷廠(chǎng)家。這些都不是我們今天關(guān)注的重點(diǎn)，我們在這里只關(guān)注鱟試劑替代產(chǎn)品：重組C因子內毒素檢測試劑盒。
梅里埃也為自己的rFC產(chǎn)品定制一款專(zhuān)用檢測儀，比較眾多廠(chǎng)家后也選擇BioTek Instruments，為了更好匹配自己試劑的特點(diǎn)，梅里埃定制SynergyHTX多功能內毒素檢測儀。
SynergyHTX多功能內毒素檢測儀，該儀器具有卓越的溫控能力， rFC特異性專(zhuān)屬光學(xué)元件，完美的支持rFC檢測，提供穩定可靠的檢測結果。該儀器同時(shí)也可以兼容傳統動(dòng)態(tài)濁度法細菌內毒素檢測。
生物梅里埃ENDONEXT?內毒素檢測試劑盒系列，其使用靈活，檢測快速，并可以應對復雜樣品，可應用于原輔料、過(guò)程控制和終產(chǎn)品檢測。
生物梅里埃EXDONEXT可為每一步生產(chǎn)過(guò)程提供內毒素檢測方案
是時(shí)候讓這家公司冒個(gè)泡了，BioTek Intruments，微孔板相關(guān)設備的制造商領(lǐng)導者之一，其生產(chǎn)的微孔板檢測儀ELx808IU，Epoch2，SynergyHTX，SynergyH1已經(jīng)成為內毒素試劑生產(chǎn)廠(chǎng)家的首選，行業(yè)標準。
2019年年初，2020版藥典細菌內毒素檢測征求意見(jiàn)稿發(fā)布，在內毒素檢測行業(yè)內引起激烈討論，作者多年來(lái)一直混跡于這個(gè)行業(yè)，總覺(jué)得應該說(shuō)點(diǎn)什么,但是又不曉得說(shuō)啥子，就對這個(gè)征求意見(jiàn)稿解讀一下，希望可以?huà)伌u引玉，有越來(lái)越多的朋友一起討論。
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