點(diǎn)寸微光，照亮生命科學(xué)檢測：熒光藻膽蛋白選擇與應用

熒光技術(shù)現廣泛應用于生命科學(xué)研究之中，主要用于檢測生物分子的時(shí)空動(dòng)態(tài)變化和分布。藻膽蛋白作為天然熒光蛋白，因其優(yōu)異的量子效率、良好的水溶性等特點(diǎn)，在 FRET 篩選、流式細胞術(shù)、免疫分析以及 MHC 四聚體檢測等方面的應用日益廣泛。

安捷倫位于加利福尼亞州的專(zhuān)有連續培養設施以及豐富的生產(chǎn)經(jīng)驗和嚴格的工藝都確保了天然藻膽蛋白的高純度和批間一致性，并避免了外來(lái)生物和開(kāi)放海域中的污染物，成為藻膽蛋白的首選供應商。

安捷倫豐富的產(chǎn)品線(xiàn)包括不同光譜特性的常用藻膽蛋白，活化藻膽蛋白以及鏈霉親和素藻膽蛋白結合物，可以滿(mǎn)足不同應用的需求。藻膽蛋白是作為檢測信號分子整合到分析檢測體系中的，藻膽蛋白的選擇、偶聯(lián)工藝以及與檢測體系的匹配和優(yōu)化均能影響檢測性能。本文擬對以上三個(gè)方面略作闡述，希望能助您的應用開(kāi)發(fā)一臂之力。熒光藻膽蛋白的選擇常用藻膽蛋白包括藻紅蛋白、別藻藍蛋白、交聯(lián)別藻藍蛋白以及 C-藻藍蛋白等多種不同光譜特性、分子量和穩定性的熒光蛋白。各種類(lèi)型的藻膽蛋白在應用上有通用性，均廣泛用于熒光免疫標記。具體到特定的藻膽蛋白，由于光譜特性和應用習慣等原因，也有特定的適用范圍。比如流式細胞分析中廣泛使用的是 R-藻紅蛋白。下表是常用藻膽蛋白性質(zhì)以及應用索引表。

偶聯(lián)工藝藻膽蛋白通過(guò)與抗體或其他蛋白質(zhì)偶聯(lián)而進(jìn)入檢測體系。常用連接方式包括使用化學(xué)交聯(lián)劑連接，或通過(guò)鏈霉親和素-生物素系統進(jìn)行連接?；瘜W(xué)交聯(lián)方式是將藻膽蛋白通過(guò)化學(xué)共價(jià)偶聯(lián)直接與抗體的游離巰基結合。具體而言，是將藻膽蛋白用 SMCC 活化處理，生成活化藻膽蛋白；然后將抗體中的二硫鍵還原生成游離巰基，與活化藻膽蛋白上的馬來(lái)酰亞胺基團進(jìn)行反應的方法。整個(gè)流程操作步驟較多，并需要較為豐富的操作經(jīng)驗方能確保交聯(lián)效果良好和穩定。在交聯(lián)方面安捷倫特推出活化藻膽蛋白和偶聯(lián)試劑盒來(lái)簡(jiǎn)化偶聯(lián)流程提升偶聯(lián)質(zhì)量。

安捷倫 R-藻紅蛋白 (RPE) 偶聯(lián)試劑盒包含將多達 1 mg 抗體與 RPE 偶聯(lián)所需的一切試劑。試劑盒采用將抗體中的二硫鍵 還原生成游離巰基，然后與 SMCC-RPE 上的馬來(lái)酰亞胺基團進(jìn)行反應的方法。包括完整的分步操作規程，可進(jìn)行小規模偶聯(lián)（低至 50 μg 抗體）。該試劑盒還適用于其他含巰基蛋白質(zhì)的偶聯(lián)。它利用廣泛使用而可靠的偶聯(lián)化學(xué)反應和超高純度的 RPE。偶聯(lián)物可在短短兩個(gè)小時(shí)內準備就緒。

性能優(yōu)化不同的應用經(jīng)常會(huì )有特定的要求。磁珠類(lèi)檢測通常需要較低的背景噪音，而 Luminex 流式熒光往往需要高亮度的熒光蛋白。安捷倫注意到不同應用的需求，通過(guò)調整偶聯(lián)方式，使得 SA-RPE 偶聯(lián)物在整體平均分子量上有所不同。例如，PJ39S SA-RPE 可能是單形結構（大 約 2–3 個(gè) SA 分子與單個(gè) RPE 分子偶聯(lián)），其他偶聯(lián)物結構較大，包含 1 個(gè)以上的 RPE 分子。這種分子大小尺寸上的差異為檢測性能的進(jìn)一步優(yōu)化創(chuàng )造了條件。下表是特定應用對應的 SA-RPE 的最佳大小。